Abstrak
Dekarboksilasi enzimatik asam fenolik memungkinkan produksi stirena fenolik berbasis hayati dalam kondisi reaksi ringan. Namun, gugus para-fenolik bebas dapat menyebabkan produk sampingan yang tidak diinginkan selama polimerisasi, sehingga perlindungan gugus OH fenolik bebas sangat penting untuk aplikasi dalam perekat. Di sini kami menyajikan reaksi kaskade dua langkah satu pot, di mana dekarboksilase asam fenolik dari Bacillus subtilis (BsPAD) mengkatalisis dekarboksilasi asam kumarat, asam kafeat, asam ferulat, dan asam sinapat, diikuti oleh O-metilasi stirena fenolik intermediet oleh resveratrol O-metiltransferase dari Vitis vinifera (VvROMT). Urutan reaksi menghindari isolasi dan pemurnian hidroksistirena intermediet reaktif. Karakterisasi varian dengan substitusi asam amino dalam rongga situs aktif menyebabkan identifikasi mutan tanpa aktivitas terhadap keempat asam fenolik. Hal ini menghindari O-metilasi yang tidak diinginkan dari bahan awal, yang tidak diinginkan karena dekarboksilase tidak mengubah asam p-metoksifenolik yang terbentuk. Lebih jauh, variasi asam amino di situs aktif menyebabkan identifikasi mutan dengan aktivitas yang lebih baik untuk keempat stirena fenolik. Hasilnya merupakan langkah penting menuju sintesis turunan metoksi stirena yang berasal dari biomassa yang fotopolimerisasinya menghasilkan polimer dengan sifat adhesi yang luar biasa.